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(本文编辑:邓丽萍) [收稿日期] 2017-01-08
1.3 观察指标
1.3.1 血脂检测 16周后,大鼠禁食12 h ,戊巴比妥钠麻醉后,心脏采血,离心,取上层血清,测定总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的浓度。
1.3.2 肝脏病理形态学观察 实验大鼠处死后, 取出肝脏, 切下右叶, 用10%中性福尔马林溶液中固定,石蜡切片,HE染色,在光镜下观察各组大鼠肝脏病理改变。以目镜测微网一个大网格微单位面积计数贮脂细胞数目,每张切片在10×40倍镜下计数20个视野,取平均值统计分析。
1.4 统计学处理 数据均采用SPSS 13.0软件处理,计量资料以均数±标准差(x±s)表示,采用方差分析,计数资料用率表示,采用χ2检验,P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 普洱茶和绿茶对大鼠血脂水平的影响 高脂组血清TC、TG显著高于正常组(P＜0.05),绿茶组、普洱茶组血清TC、TG水平较高脂组显著降低(P＜0.05),且与普洱茶组相比,绿茶组的TC和TG值更低,其有统计学差异(P＜0.05);高脂组血清LDL-C显著高于正常组,血清HDL-C则低于正常组,与高脂组相比,普洱茶和绿茶组均可显著降低LDL-C水平(P＜0.05),升高HDL-C水平(P＜0.05);其中,绿茶降低LDL-C效果强于普洱茶,而普洱茶升高HDL-C效果强于绿茶(P＜0.05),见表1。
表1 普洱茶和绿茶对大鼠血脂的
影响(x±s,n=10,mmol/L)
| 组别 | TC | TG | HDL-C | LDL-C | | 正常组 | 1.70±0.161) | 0.31±0.061) | 0.97±0.071) | 0.74±0.091) | | 高脂组 | 4.13±0.292) | 1.06±0.152) | 0.74±0.072) | 1.99±0.212) | | 绿茶组 | 2.37±0.161)2) | 0.69±0.111)2) | 1.02±0.101)2) | 1.32±0.101)2) | | 普洱茶组 | 3.45±0.211)2)3) | 0.83±0.121)2)3) | 1.27±0.101)2)3) | 1.49±0.131)2)3) |
1)与高脂组比较:P<0.05;2)与正常组比较:P<0.05;3)与绿茶组比较:P<0.05
2.2 各组大鼠肝脏组织病理观察 正常组:肝小叶清晰可见,结构正常,肝细胞体积正常,排列整齐(见图1A);高脂组:肝细胞呈严重脂肪变性,脂滴堆积程度严重,呈大片状弥漫性分布,肝细胞浆内见多量大小不等的脂肪空泡,许多小的脂肪空融合形成大的脂滴,挤压细胞核(见图1B);普洱茶和绿茶组肝脏内脂质堆积程度明显减小,脂滴空泡散在分布,且体积较小,肝细胞结构较模型组清晰(图1C-D),镜下普洱茶组与绿茶组无明显区别。
 图1 各组大鼠肝脏组织病理图(A: 正常组;B: 高脂组;C: 普洱茶组;D: 绿茶组,HE×400)
2.3 肝脏重量、贮脂细胞数量比较 高脂组大鼠肝重量、贮脂细胞数量明显高于正常组, 其差异有统计学意义(P＜0.05);普洱茶和绿茶组肝重量、贮脂细胞数量明显低于高脂组(P＜0.05),但普洱茶和绿茶组肝重量、贮脂细胞数量比较差异无统计学意义(P>0.05), 见表2。
表2 各组动物肝脏重量、细胞脂变情况的
比较(x±s,n=10)
| 组别 | 肝脏重量 | 贮脂细胞数(个) | | 正常组 | 9.62±1.171) | 1.58±0.381) | | 高脂组 | 18.31±3.072) | 2.42±0.482) | | 绿茶组 | 13.93±1.761) | 1.77±0.841) | | 普洱茶组 | 13.10±2.041) | 1.22±0.321) |
1)与高脂组比较:P<0.05;2)与正常组比较:P<0.05
3 讨论
由于饮食结构的转变,高脂血症目前已成为危害人类健康的重要疾病之一,也是导致动脉粥样硬化、冠心病和高血压等心血管疾病的重要因素[7,8]。高脂血症是代谢紊乱的标志,也是脂肪肝的主要诱因之一。高脂饮食进入肝脏或肝内产生的游离脂肪酸,过剩的游离脂肪酸被脂化为三酰甘油贮存于肝脏,引起肝脏脂肪变及脂质代谢紊乱。
本研究采用高脂饲料喂饲SD雄性大鼠,饲喂高脂饲料4周后的大鼠TC,TG和LDL-C水平显著高于正常对照组(P＜0.05),HDL-C水平显著低于正常对照组(P＜0.05),表明造模成功。此模型是研究调血脂药物的最常用的动物模型[9]。
近年来,国内外学者对不同产地多种品种的茶进行了研究,对茶提取物的提取方法和功效做出了相关报道[10]。因其制作工艺的不同可主要分为4个品种:未发酵的绿茶,完全发酵的红茶,半发酵的乌龙茶及后发酵的普洱茶,但目前国内外的研究还是主要集中在绿茶及其组分上面。绿茶作为一种天然饮品已有千年历史,其有效活性成分具有降脂、抗肿瘤、抗氧化等多种作用[11,12]。普洱茶原产于我国云南西双版纳及普洱一带,是以云南特有的大叶种晒青毛茶在高温高湿的环境中及微生物的参与下,经特殊后发酵工艺包括自然发酵(非酶性氧化)和渥堆发酵(微生物酶促氧化)而制成的发酵茶。普洱生茶为未经发酵的晒青毛茶; 普洱熟茶为采用渥堆工艺,经微生物发酵后,加工形成的散茶和紧压茶。普洱熟茶保存可长达20～50年,甚至更久[13]。普洱茶的减肥、降脂、抗衰老等多种保健功能及其作用机理研究主要针对普洱熟茶[14]。
本实验中,两组茶提取物均能显著降低大鼠血清TC、TG和LDL-C水平,升高HDL-C水平,这与以往研究普洱茶、绿茶降脂功效的结果一致,证实了两种茶的降脂作用。观察中发现,两种茶降血脂的侧重点不同,绿茶降低TC、TG和LDL-C的效果明显优于普洱茶,普洱茶升高HDL-C水平的作用则显著强于绿茶。绿茶已被证实主要活性成分为茶多酚,茶多酚的主要成分是儿茶素类化合物,其中以表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)含量最高[15,16]。EGCG可以通过67 kD层黏连蛋白受体介导脂筏聚簇[17],明显降低动脉粥样硬化模型大鼠血清TC、TG、LDL水平,升高HDL水平[18]。但是普洱茶的产地气候、原料、加工方法与绿茶不尽一致,经发酵后,其内含成分发生了很大的变化,因此对血脂的调节机制与绿茶也有可能不同。有研究[19]发现,普洱茶提取物通过下调脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)、羟甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)、胰脂肪酶(PL)及上调卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)等血脂代谢关键酶从而调节血脂代谢。
本实验中,大鼠肝脏病理切片HE染色显示:两组茶提取物组肝脏脂肪变程度明显低于高脂组,且显著降低肝脏重量及贮脂细胞数,但组间无差异。提示茶提取物通过降低高脂血症血脂浓度,减少大鼠肝脏脂肪沉积,预防肝脏弥漫性脂肪变性,由此认为普洱茶和绿茶对高脂饮食诱导的脂肪肝具有一定的防治作用。因两种茶的成分及加工方式不同,针对普洱茶和绿茶降血脂、预防脂肪肝作用的具体有效活性成分及作用机制还需进一步的研究。
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