结核分枝杆菌Ag85B蛋白的原核表达、纯化及其促PBMC增殖活性的测定
杨登科;靳风烁;江军;张勇;闫天中
第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科,重庆,400042
Prokaryotic Expression and Purification of Mycobacterium Tuberculosis Ag85B Protein and Evaluating of Its Activity on Promoting Human PBMC Proliferation
摘要 [目的]在大肠杆菌中表达结核分枝杆菌Ag85B蛋白,并对其进行纯化和测定其促人PBMC增殖活性.[方法]将构建的pGEX-Ag85B/BL21活化后接种于LB培养基中,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白的表达,包涵体变性后经梯度浓度尿素复性, GST-Sepharose亲和层析、凝血酶切除GST并再次亲和层析纯化;MTT法测定重组Ag85B对人PBMC增殖的促进作用.[结果]成功在大肠杆菌中高效表达出GST/Ag85B融合蛋白,占菌体总蛋白的30%,主要以包涵体形式表达;包涵体复性后经GST-Sepharose亲和层析、凝血酶切除GST并再次亲和层析纯化获得纯度为96%的重组Ag85B蛋白;该蛋白能够促进人PBMC的增殖,增殖幅度随浓度增加而增加,刺激72h时达增殖最高峰.[结论]高效表达并纯化了结核分枝杆菌Ag85B蛋白,该蛋白具有促进人PBMC增殖的活性,为进一步研究其在膀胱肿瘤免疫治疗中的作用奠定了基础.
关键词 ：
分支杆菌 ,
结核 ,
蛋白质类 ,
单核细胞
收稿日期: 2005-02-20
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