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| 人巨细胞病毒UL123基因全长及其外显子4的克隆与表达 |
| 文兰;陈利玉;邬国军;傅鹰;罗旻;罗敏华;赵俊琴 |
| 中南大学湘雅医学院微生物学教研室,湖南,长沙,410078 |
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| Cloning and Expression of the cDNA Full-length and Exon 4 of Human Cytomegalovirus UL123 Gene |
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摘要 [目的]克隆人巨细胞病毒(HCMV)UL123基因cDNA全长(ie1)及其外显子4(ie1-exon 4),构建原核表达重组质粒,诱导立即早期蛋白1(IE1)及其C-端86-491氨基酸(IE1-C86～491)表达,并鉴定表达产物.[方法]分别用RT-PCR和PCR法将ie1和ie1-exon 4从感染了HCMV的人胚肺成纤维细胞(HEL)中扩增出来,再分别克隆入原核表达载体pTWIN1上intein2的N端,转化大肠杆菌,经PCR、限制性酶切和测序鉴定阳性重组子,在低温和低IPTG浓度下诱导重组子表达可溶性重组融合蛋白rIE1/intein2和rIE1-C86～491/intein2,用SDS-PAGE和Western Blotting对表达产物进行鉴定.[结果]经PCR、限制性酶切和测序鉴定重组质粒pTWIN1/ie1和pTWIN1/ie1-exon 4构建成功,SDS-PAGE和Western Blotting分析表明融合蛋白在大肠杆菌中表达.[结论]成功克隆并表达了ie1和ie1-exon 4.
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| 关键词 ：
巨细胞病毒属/遗传学,
基因表达,
克隆,
分子
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收稿日期: 2006-06-20
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| 基金资助:中国科学院资助项目(30470088) |
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