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| 热休克因子在过氧化氢所致小鼠胚胎成纤维细胞损伤中的作用 |
| 刘可;王浩;易宇欣;刘梅冬;陈广文;王慷慨;肖献忠 |
| 中南大学湘雅医学院病理生理学系心血管病理生理研究室,湖南,长沙,410078 |
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| Effect of Heat Shock Factor 1 (HSF1) on Hydrogen Peroxide-Mediated Impairment of Mouse Embryonic Fibroblasts (MEFs) |
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摘要 [目的]探讨热休克因子1(heat shock factor 1,HSF1)对过氧化氢所致小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)损伤的影响.[方法]利用HSF1基因敲除(HSF1-/-)小鼠和转基因技术,通过稳定转染SV40大T抗原基因,建立缺失HSF1基因(HSF1-/-纯合子)和含有HSF1基因(HSF1+/+野生型)的永生化MEFs,并采用免疫印迹和基因组DNA PCR技术进行鉴定.向细胞培养基中加入终浓度为0.5 mmol/L的过氧化氢导致细胞损伤,采用甲苯胺兰染色和总蛋白合成能力分析方法来判定致细胞损伤程度(核仁的结构和功能改变).[结果]PCR产物电泳显示在各种基因型MEFs中均含有SV40大T抗原基因,在HSF1-/-MEFs中仅含有替代基因,在HSF1+/+MEFs中仅含HSF1基因,在HSF1-/+MEFs中则含有替代基因和HSF1基因;免疫印迹显示热休克反应(heat shock response,HSR)不能诱导HSF1-/-MEFs中HSP70表达.甲苯胺兰染色和总蛋白合成能力分析显示0.5 mmol/L过氧化氢可引起HSF1+/+MEFs及HSF1-/-MEFs核仁分离及蛋白质合成抑制,与正常对照组相比,P＜0.05;HSR能显著抑制过氧化氢所致HSF1+/+MEFs核仁分离及蛋白质合成抑制,与单纯过氧化氢损伤组相比,P＜0.05,但HSR对过氧化氢所致HSF1-/-MEFs核仁分离及蛋白质合成抑制没有影响,与单纯过氧化氢损伤组相比,P＞0.05.[结论]HSR以一种HSF1依赖方式显著抑制过氧化氢所致细胞核仁结构与功能损伤.
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| 关键词 ：
成纤维细胞,
胚胎,
小鼠,
过氧化氢,
热休克蛋白质类
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收稿日期: 2007-01-20
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| 基金资助:国家重点基础研究发展计划(973计划)(G2000056908)%国家自然科学基金(30300177;30470851) |
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