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| 抗环胍氨酸肽单链噬菌体抗体库的建立 |
| 铁宁;王勇;张桂枝;赵静;李鸿斌 |
| 内蒙古医科大学附属医院风湿免疫科,内蒙古 呼和浩特,010059 |
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| Construction of Single-chain Fragment V Antibody pHEN2 Phagemid Library of Anti-cyclic Citrullinated Peptide |
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摘要 [目的]拟构建并鉴定抗环胍氨酸肽(cyclic citrullinated peptide,CCP)单链片段V(Single chainFragment V,ScFv)噬菌体抗体库,为进一步可溶性表达和检测类风湿性关节炎(RA)关节滑膜的CCP表达情况,揭示CCP及其抗体在RA发病中作用奠定基础.[方法]①分离抗CCP抗体阳性患者外周血单个核细胞,提取mRNA并反转录cDNA.扩增免疫球蛋白重链可变区(VH)和轻链可变区(VL).通过重叠聚合酶链反应(PCR)用连接片段将VH和Vκ/Vλ体外连接成单链抗体基因;SfiⅠ和Not Ⅰ酶切并与噬菌粒pHEN2连接;将pHEN2 ScFv电转至感受态大肠杆菌TG1,建立抗CCP-ScFv噬菌体抗体库;②检测抗CCP-ScFv pHEN2噬菌体的库容、插入效率;[结果]抗CCP-ScFv噬菌体抗体库库容8.76×108 CFU cfu/mL,插入频率83.3％;插入率83.33％.所插入DNA片断约1180 bp.MSP Ⅰ酶切指纹图谱鉴定也显示多样性.[结论]所构建抗环胍氨酸肽单链噬菌体抗体库库容可满足进一步可溶性表达的要求.
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| 关键词 ：
细菌噬菌体,
抗体,
肽类
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收稿日期: 2013-10-20
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| 基金资助:国家自然科学基金(30760235) |
| [1] |
刘红燕;王瑞;施菁玲. 糖尿病肾病患者血清结缔组织生长因子和肿瘤坏死因子表达及其临床意义[J]. 医学临床研究, 2014, 31(1): 53-54,58. |
| [2] |
尤兰华;童春堂;韩春红;李雪辉;郭沛艳;陈杭薇. 新兵流感病毒抗体检测的临床分析[J]. 医学临床研究, 2013, 30(9): 1692-1694. |
| [3] |
龚钰婷;梁玉梅. 肿瘤坏死因子及其单克隆抗体对肾病综合征复发患者糖皮质激素受体表达的影响[J]. 医学临床研究, 2013, 30(5): 841-843. |
| [4] |
郑昌荣. 美沙拉嗪治疗强直性脊柱炎的疗效及对患者自身抗体的影响[J]. 医学临床研究, 2013, 30(2): 261-262. |
| [5] |
罗泉芳. 系统性红斑狼疮患者自身抗体、免疫球蛋白及补体的变化及临床意义[J]. 医学临床研究, 2013, 30(2): 269-271. |
| [6] |
肖婷;蔡宏伟;张溪英;周星星;孙杨丹. 持续输注尼莫酮对颅内动脉瘤栓塞术中 ET 和 CGRP 的影响[J]. 医学临床研究, 2013, 30(11): 2171-2173. |
| [7] |
张大伟;秦优优;习勋;刘世浩;仲磊;单东力;闫朝岐. 乳腺癌患者手术外科治疗前后血清内皮素变化及其意义[J]. 医学临床研究, 2013, 30(1): 161-163. |
| [8] |
覃海波;胡庆涛;蒋春燕;符敏. 金因肽预防鼻咽癌患者放疗中放射性皮炎的效果[J]. 医学临床研究, 2013, 30(1): 179-180. |
| [9] |
杨春芬. 子宫肌瘤患者肥胖与瘦素、肿瘤坏死因子α的相关性探讨[J]. 医学临床研究, 2012, 29(9): 1796-1797. |
| [10] |
刘娟;吴和英;谭宗建;张红云;张勇. 反复自然流产患者封闭抗体检测及淋巴细胞免疫治疗的临床效果[J]. 医学临床研究, 2012, 29(8): 1488-1490. |
| [11] |
沈桢巍. 人β防御素2在肺部疾病中的作用及研究进展[J]. 医学临床研究, 2012, 29(7): 1400-1403. |
| [12] |
李龙学. 内皮素-1和C-反应蛋白对急性肺栓塞病情和预后的评估[J]. 医学临床研究, 2012, 29(6): 1086-1088. |
| [13] |
贺兼斌;廖慧中;向志;易高众;张平. 瘦素在肺纤维化大鼠肺组织中的表达及意义[J]. 医学临床研究, 2012, 29(4): 616-619. |
| [14] |
冯学威;张琦;张静岩;贾晰;周楚铭. 矽肺患者血清瘦素及增食欲素水平变化分析[J]. 医学临床研究, 2012, 29(2): 226-228. |
| [15] |
吴天慧;李志辉;段翠蓉;银燕;寻劢;张翼. 激素敏感型和耐药型肾病综合征患儿血清免疫复合物的水平及其意义[J]. 医学临床研究, 2012, 29(2): 286-289. |
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