靶向转化生长因子β1的siRNA真核表达载体的构建及鉴定
付荣泉;盛吉芳;丁继光;吴金国;洪亮;孙庆丰;方辉
温州医学院附属第三医院感染科,浙江,瑞安,325200;浙江大学医学院附属第一医院感染科,浙江,杭州,310003
Construction and Identification of Eukaryotic Expression Vector of TGFβ1-targeted siRNA
摘要 [目的]构建靶向转化生长因子β1(TGFβ1)小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体.[方法]设计二个siRNA作用靶点,体外合成的相应双链DNA被插入pSilencer-2.1质粒中,对该重组表达载体进行酶切鉴定及DNA测序.采用脂质体转入HSC-T6细胞中,利用RT-PCR法和western-blot分别检测TGFβ1 mRNA和蛋白的表达.[结果]靶向TGFβ1 的siRNA-a和siRNA-b二个表达质粒是成功构建; 与无关对照组相比,siRNA-b组对TGFβ1mRNA和蛋白表达均明显下调( P <0.01),siRNA-a组无明显下调( P >0.05).[结论]成功构建了靶向TGFβ1 基因的siRNA表达质粒,为进一步研究其阻断肝纤维化打下基础.
关键词 :
RNA ,
遗传载体 ,
转化生长因子β
收稿日期: 2010-11-20
基金资助: 浙江省自然科学基金计划项目(Y2080599)
[1]
陈娟;杨红忠;彭毅强;曾晓媛;陈垣. miRNA-155表达对人肺癌细胞A549增殖的影响 [J]. 医学临床研究, 2014, 31(2): 244-247.
[2]
黄纯;黄闪;李登举. 靶向 siRNA 沉默 Ets2基因表达对人单核细胞白血病细胞株SHI-1化疗敏感性的影响 [J]. 医学临床研究, 2013, 30(9): 1665-1667,1668.
[3]
周迪军. 阿托伐他汀联合替米沙坦对糖尿病肾病患者血清TGF-β1、CTGF的影响 [J]. 医学临床研究, 2013, 30(7): 1407-1408,1409.
[4]
吴仪;李建明;刘博. 鞘内注射曲马多对福尔马林炎性疼痛大鼠脊髓c-fos mRNA及蛋白质表达的影响 [J]. 医学临床研究, 2013, 30(4): 635-637.
[5]
张毅;刘雪妮;臧国庆;汤正好;江红;奚敏;余永胜. 慢性HBV感染者外周血T-bet mRNA的表达及意义 [J]. 医学临床研究, 2013, 30(4): 701-703,706.
[6]
王彦东. 长链非编码RNA(LncRNA)HOTAIR研究进展 [J]. 医学临床研究, 2013, 30(4): 779-781.
[7]
田鑫;邹惠;贺湘玲;杨曼琼;邹润英. 儿童白血病 FHIT 的 mRNA 表达研究 [J]. 医学临床研究, 2013, 30(12): 2298-2301.
[8]
赵延恕;冯莉莉;吕小玲;聂赛. 成人先天性心脏病伴肺动脉高压患者血浆 VEGF 与 TGF-β1浓度变化的相关研究 [J]. 医学临床研究, 2013, 30(11): 2154-2156,2157.
[9]
姚鲲;何晓薇;李旸;吴斌;杨威;廖爱军;刘卓刚. TGF-β1诱导HL-60细胞凋亡后Smads蛋白的变化 [J]. 医学临床研究, 2013, 30(10): 1946-1949.
[10]
李秀成;韩刚;孙侃;常向云;李军. 螺内酯对2型糖尿病大鼠血管PAI-1mRNA表达的影响 [J]. 医学临床研究, 2013, 30(1): 38-40.
[11]
李晓丽;曹国良*;施惠华;凌丹芸;王传慧. 肺鳞癌患者血清miRNA181a的表达及其对肺癌细胞功能的影响 [J]. 医学临床研究, 2012, 29(9): 1649-1651.
[12]
李全修;董树平;刘欣;樊培新;刘勇. 外源性转化生长因子β1对胎儿软骨终板细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖的影响 [J]. 医学临床研究, 2012, 29(6): 1083-1085.
[13]
李洁;周平;胡秀梅;彭佑铭. miRNA-192慢病毒表达载体构建及其抗高糖刺激氧化损伤作用 [J]. 医学临床研究, 2012, 29(5): 807-810.
[14]
于春水;苏江维;胡珍;熊芬;邓利丽. HIF-1α mRNA在寻常型银屑病及脂溢角化病皮损表皮中的表达及意义 [J]. 医学临床研究, 2012, 29(5): 810-812.
[15]
张瑶;胡治平**;高小平;彭熠;高菊华. 沙鼠脑缺血再灌注和美满霉素干预后 T G F‐β3与高尔基体的变化研究 [J]. 医学临床研究, 2012, 29(10): 1843-1846.